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无外泌体胎牛血清的制备和应用

发布时间: 2022-08-24  点击次数: 837次
  无外泌体胎牛血清的制备和应用
  无外泌体胎牛血清适用外泌体研究,无支原体,无内毒素。胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是大多数细胞培养重要的生长支持物。天然来源的FBS会含有大量的外泌体(exosome)等囊泡(Extracellular Vesicles)成分。由于FBS来源的外泌体会对研究结果产生巨大干扰,因此,外泌体研究时必须使用去除外泌体后的FBS进行细胞培养。
  细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后,细胞融合度约为 60%-70%时,移去原有含血清的培养基,换成新鲜的无外泌体胎牛血清,继续培养 48h 左右,细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清,该上清液即可用于提取外泌体。
  制备
  无外泌体胎牛血清的制备:用0.22um的滤膜过滤胎牛血清,滤液置于超高速离心管中,4℃,120000g超高速离心90min,收集上清液。
  应用
  无外泌体胎牛血清可用于犬MSC来源外泌体的分离:用10%无外泌体胎牛血清、1%双抗、1%L-谷氨酰胺和88%DMEM基础培养基配制*培养基,以制得的*培养基传代培养MSC,取第3-5代收集上清在4℃,300g离心10min除去死细胞;收集上清后在4℃,16500g离心20min除去细胞碎片;收集上清后用0.22um的滤膜过滤;收集上清后在4℃,120000g超高速离心90min;去上清后,用生理盐水重悬沉淀,再次以4℃,120000g超高速离心90min;去上清后,用生理盐水重悬沉淀,收集悬液即为犬MSC外泌体制剂。