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你知道细胞培养的具体步骤都有哪几步吗?

发布时间: 2022-12-07  点击次数: 474次
  你知道细胞培养的具体步骤都有哪几步吗? 
  细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长,在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中,由于环境的改变,细胞的移动或受一些其他因素的影响,培养时间加长,传代导致细胞出现单一化型。
  一、细胞复苏
  将冻存细2113胞从液氮5261中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融4102化。移人15ml离心管中,加入10ml预热1653的DMEM*培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。
  加入10mlDMEM培养基清洗,弃上清液。加入10mlDMEM*培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
  二、细胞传代
  细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1mlDMEM*培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
  加入10mlPBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10mlPBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
  三、细胞冻存
  细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM*培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10mlPBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。
  加入lml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
  冻存液的配制:70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
  科研实验中,细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian?特级胎牛血清,它适合各种细胞培养,尤其适合难养细胞,如:干细胞、肝细胞,神经细胞,原代培养、细胞融合、转染细胞等。

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