细胞培养基常见问题，谷氨酰胺、双抗和丙酮酸钠的作用

　　细胞培养基常见问题，谷氨酰胺、双抗和丙酮酸钠的作用

　　细胞培养基是细胞培养中最基础也是最不可缺少的环节，如果细胞状态不好，后续试验将无法进行。让我们看看细胞培养基会出现的常见问题：

　　如何选用培养基?

　　参考以往论文，或咨询细胞株供应商

　　根据实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI-1640；肉瘤、淋巴细胞实验，可选McCoy’s 5A；造血细胞培养可用Fischer’s培养基。

　　用多种培养基培养目的细胞，通过生长状态、生长曲线、集落形成率等指标选择最佳培养基。

　　美国菌种保藏中心ATCC(American Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。输入细胞名称就可以查询到细胞的具体来源、培养体系和注意事项等，此外还提供专业的细胞培养指南供细胞培养者学习。此外，还可通过Expasy、DSMZ等细胞数据库查找信息。

　　培养基要避光保存？

　　培养基瓶上都会标注避光保存，因为培养基中的某些成分遇光会产生过氧化氢，具有细胞毒性。我们在超净台中处理细胞时，因为时间较短，不会产生太大问题。但是长时间光照下，会造成培养基质量的下降。

　　液体培养基可以放冷冻保存吗？

　　不可以，培养基应保存在4℃冰箱中。在-20℃下，培养基中的盐容易析出。融化后，有的盐可能无法重新溶解，出现渗透压降低，颜色会变深，PH值升高。

　　培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

　　新鲜培养基中添加血清和抗生素，应在两到三周内使用。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后开始降解。

　　培养液pH是怎样影响细胞生长的？

　　大多数细胞适宜pH值为7.2-7.4，各种细胞对pH值要求也各不相同，原代细胞培养对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。

　　培养基中的HEPES是一种优良的生物缓冲剂，对细胞无毒性作用，能够较长时间保持恒定的pH范围，防止培养液pH波动较大对细胞生长产生不利的影响。

　　培养基中的NaHCO3 与二氧化碳形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。所有的干粉培养基都不含NaHCO3 ，加水溶解后添加NaHCO3。

　　为什么有客户要求培养基中不含酚红？

　　酚红作为pH指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

　　但研究表明酚红可以模拟固醇类激素（特别是雌激素）的作用，因此在涉及雌激素敏感的细胞时（如乳腺组织），最好使用不含酚红的培养基。此外，酚红会干扰流式细胞分析时候的检测；部分无血清培养基中的酚红会干扰钠-钾平衡。

　　谷氨酰胺的作用？

　　是细胞培养中所必需的一种营养元素。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，会自发降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨对细胞有害。

　　L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。

　　双抗的作用？

　　青霉素-链霉素混合液通常也被称为“双抗”，预防微生物污染最常用的抗生素。其中，青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，对革兰阳性菌特别有效；而链霉素能够与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有效，但对革兰氏阴性菌特别有效。青霉素和链霉素联合使用可以预防绝大部分的细菌污染。

　　丙酮酸钠的作用？

　　丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。善义举。华晨阳将持续关注疫情形势和防控工作需要，弘扬爱心善举，为疫情防控贡献新力量。