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Protein G Magnetic Beads 磁珠

Protein G Magnetic Beads 磁珠

简要描述:Protein G Magnetic Beads 磁珠: 免疫沉淀系列

浏览量: 87

所属分类:磁珠

更新日期:2020-07-30

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌自营品牌规格1ml/5ml
供货周期现货主要用途蛋白免疫沉淀
应用领域生物产业

Protein G Magnetic Beads 磁珠

Protein G磁珠在大小为0.2 um的纳米磁珠上共价结合了大量的Protein G蛋白,与传统的Protein G免疫沉淀琼脂糖凝胶比较,抗体结合能力相同,背景更低的特点,由于采用磁性分离,使得每次IP和CoIP可以节省40%的时间。

名称

特性

磁珠大小

0.2 μm

磁珠浓度

10 mg/mL

IgG 结合量

0.5 mg/mL

适用范围

IP,CoIP等

稳定性

pH 6-8, 4oC长期稳定

储存条件

4oC

Protein G Magnetic Beads 磁珠储存条件

pH 6-8, 4oC长期稳定,禁止产品冻结。

 

Protein G Magnetic Beads 磁珠使用说明

1. 样品制备

请根据不同的样品选择合适的处理方法:

样品

样品处理

 

血清

若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100   µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

 

 

悬浮细胞

离心收集细胞(4oC, 500 g, 10min),弃上清后称重,按每毫克细胞50µL的比例用1× PBS洗涤 2次;按每毫克细胞5~10 µL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10min;离心收集上清液(4oC, 12000g,10min),置于冰上备用(或置于-20oC长期保存)。

 

 

贴壁细胞

移去培养基,按每 1.0×105个细胞150 µL的比例用1×PBS洗涤两次;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5 mLEP管内,按每 1.0×105个细胞20~30 µL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10min,离心收集上清液(4oC, 12000g,10min), 置于冰上备用(或置于-20oC长期保存)。

 

 

大肠杆菌

离心收集大肠杆菌(4oC,12000g,2min),弃上清后称重,按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5~10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF),重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4oC,12000g,10min)。

2. 磁珠预处理:

将磁珠充分混匀,取25~50 µL磁珠,400 µL结合缓冲液洗涤3次,弃上清。

3. 抗体与磁珠结合:

3.1 抗体稀释:结合缓冲液稀释抗体至终浓度为5~50 µg/mL,置于冰上备用。

3.2 抗体结合:将准备好的400 µL抗体加入准备好的磁珠中,置于翻转混合仪孵育(常温30 min,4℃,2 h),后进行磁性分离,收集上清液置于冰上以备后续检测。

3.3洗涤(Washing):400 µL结合缓冲液洗涤3次,每次10min。

*注意:结合过程中,磁珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象 ,不会影响实验结果。

4. 抗原与抗体-磁珠复合物结合

4.1 加入400 µL步骤1准备的样品,置于翻转混合仪(常温30 min,4℃,2 h)。

4.2 洗涤(Washing):400 µL结合缓冲液洗涤4次,每次5min。

4.3 洗脱(Elution):本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案,操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。

4.3.1 变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入60 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer混合均匀,100℃加热10min。分离磁珠,收集上清,进行SDS-PAGE检测。

4.3.1非变性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析。分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入25-50 µL洗脱缓冲液,室温孵育10 min;分离磁珠,收集上清液至新的EP管,并立即加入1 µL中和缓冲液将洗脱产物pH调节至中性,用于后期功能分析。



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