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ToloScript RT SelectMix for qPCR反转录酶

ToloScript RT SelectMix for qPCR反转录酶

简要描述:ToloScript RT SelectMix for qPCR反转录酶是将 PCR 反应用到的超保真 P6 DNA 聚合酶、buffer、dNTP Mixture 以及稳定剂以 2倍的终浓度进行混合。

浏览量: 417

所属分类:酶

更新日期:2023-04-26

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌其他品牌规格1 mL/10 *1 mL/50 *1 mL
供货周期现货主要用途PCR反应
应用领域生物产业

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反转录酶

包含新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase RTase)和针对逆转录优化

的缓冲液,进一步提高了 cDNA 合成的效率,适用于两步法 qRT-PCR 反应。试剂盒中可根据实验需求选择 Oligo

(dT)23VNRandom Primers 以及基因特异性引物为逆转录引物。逆转录产物兼容染料法与探针法 qPCR,可进行基

因表达的高效分析。

产品组成

组分

22102-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反转录酶

400 μL

Oligo (dT)23VN10 μM

100 μL

Random Primers (50 ng/μL)

100 μL

5 × No RT Control Mixb

40 μL

a. 包含 BufferdNTPToloScript RTaseRNase inhibitorRandom primers/Oligo (dT)23VN primer mix

b. 除不含 ToloScript RTase 外,其余成分与 5 × ToloScript qRT SelectMix 相同,用于配制 No RT 对照反应。

保存条件

-20 ℃储存。

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反转录酶

质量控制

纯度检测:所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及 RNase 残留。

功能检测:以 1 µg HeLa 细胞总 RNA 为模板进行逆转录反应,通过 qPCR 检测 4 个基因的表达量,Ct 值在批次间产

品中基本相同。在 1 µg HeLa 细胞总 RNA 中混入 100 ng gDNA,经 2-Step gDNA Erase-Out Mix 处理后加入 No

RT Control Mix,然后进行 qRT-PCR,获得的 Ct >40

实验流程

1. cDNA 的合成

RNase-free 的离心管中配置如下体系,用移液器轻轻吹打混匀。

5 × ToloScript qRT SelectMix

4 µL

Oligo (dT)23VN10 μM

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT SelectMix for qPCR

 

 

No RT Control 是指不加逆转录酶的阴性对照反应,用于检验 RNA 模板中是否有 gDNA 残留。

RNase-free 离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。

5 × No RT Control Mix

4 µL

Oligo (dT)23VN10 μM

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 进行逆转录反应

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

 

产物可立即用于 qPCR 反应,或冻存于-20℃,并可在半年内使用;如需长期存放,则建议将反转录 cDNA 产物分装

后冻存于-80 ℃cDNA 应避免反复冻融。

注意事项

1. 由于 5 × ToloScript qRT SelectMix 5 × No RT Control Mix 中均含有高浓度的甘油,所以在使用前请

短暂离心,并轻弹(或用移液枪轻轻吸打混匀)后,准确吸取。

2. 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg Total RNA。若目的基因的表达量非常低,则可以

多加入 5 µg Total RNA;否则,如果加入 RNA 量过高,可能会超出后续 qPCR 的线性范围。

3. 本试剂盒制备的 cDNA 产物仅适用于 qPCR 反应,不适用于进行长片段目的基因的 PCR 扩增。

4. 由于本试剂盒中不含有 gDNA 去除步骤,建议加入 No RT Control 反应步骤。若 RNA 样本中含有

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反转录酶包含新一代逆转录酶 ToloScript Reverse Transcriptase RTase)和针对逆转录优化

的缓冲液,进一步提高了 cDNA 合成的效率,适用于两步法 qRT-PCR 反应。试剂盒中可根据实验需求选择 Oligo

(dT)23VNRandom Primers 以及基因特异性引物为逆转录引物。逆转录产物兼容染料法与探针法 qPCR,可进行基

因表达的高效分析。

产品组成

组分

22102-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT SelectMixa 反转录酶

400 μL

Oligo (dT)23VN10 μM

100 μL

Random Primers (50 ng/μL)

100 μL

5 × No RT Control Mixb

40 μL

a. 包含 BufferdNTPToloScript RTaseRNase inhibitorRandom primers/Oligo (dT)23VN primer mix

b. 除不含 ToloScript RTase 外,其余成分与 5 × ToloScript qRT SelectMix 相同,用于配制 No RT 对照反应。

保存条件

-20 ℃储存。

质量控制

纯度检测:所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及 RNase 残留。

功能检测:以 1 µg HeLa 细胞总 RNA 为模板进行逆转录反应,通过 qPCR 检测 4 个基因的表达量,Ct 值在批次间产

品中基本相同。在 1 µg HeLa 细胞总 RNA 中混入 100 ng gDNA,经 2-Step gDNA Erase-Out Mix 处理后加入 No

RT Control Mix,然后进行 qRT-PCR,获得的 Ct >40

实验流程

1. cDNA 的合成

RNase-free 的离心管中配置如下体系,用移液器轻轻吹打混匀。

5 × ToloScript qRT SelectMix

4 µL

Oligo (dT)23VN10 μM

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT SelectMix for qPCR

 

 

No RT Control 是指不加逆转录酶的阴性对照反应,用于检验 RNA 模板中是否有 gDNA 残留。

RNase-free 离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。

5 × No RT Control Mix

4 µL

Oligo (dT)23VN10 μM

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 进行逆转录反应

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

 

产物可立即用于 qPCR 反应,或冻存于-20℃,并可在半年内使用;如需长期存放,则建议将反转录 cDNA 产物分装

后冻存于-80 ℃cDNA 应避免反复冻融。

注意事项

1. 由于 5 × ToloScript qRT SelectMix 5 × No RT Control Mix 中均含有高浓度的甘油,所以在使用前请

短暂离心,并轻弹(或用移液枪轻轻吸打混匀)后,准确吸取。

2. 20 µL 逆转录反应体系中建议加入不超过 1 µg Total RNA。若目的基因的表达量非常低,则可以

多加入 5 µg Total RNA;否则,如果加入 RNA 量过高,可能会超出后续 qPCR 的线性范围。

3. 本试剂盒制备的 cDNA 产物仅适用于 qPCR 反应,不适用于进行长片段目的基因的 PCR 扩增。

4. 由于本试剂盒中不含有 gDNA 去除步骤,建议加入 No RT Control 反应步骤。若 RNA 样本中含有



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