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XL1-RED 电转克隆感受态

XL1-RED 电转克隆感受态

简要描述:XL1-RED 电转克隆感受态
DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株,
mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真
核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突变有利于插

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所属分类:酶

更新日期:2020-10-12

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域生物产业

XL1-RED 电转克隆感受态

产品简介

DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株,

mcrAmcrBC mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真

核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B )recA1 endA1 的突变有利于插

DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。φ80dlacZM15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛

选,rpsL 赋予其链霉素抗性。 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建,经特殊

工艺制作,pUC18 质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA

XL1-RED 电转克隆感受态

产品组成

组分

EC96101-01

EC96101-02

EC96101-03

DH10B 感受态细胞

10 × 50 μL

100 ×50μL

定制

基因型F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697

galE15 galK λ- rpsL nupG

XL1-RED 电转克隆感受态

存储条件

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留;

电转法转化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA

使用方法

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,

使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯

盖,冰中静置 5 分钟充分降温。

2. -80℃保存的 DH10B 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接

产物)并用手拨.打 EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC18

B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)

悬,DNA 浓度不超过 100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。

3. 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μFPC=200 Ω,V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按

所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

5. 2 分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用

1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心

管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml37℃,225 rpm 复苏 60 分钟。



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