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EPI300  感受态 技术新闻

EPI300 感受态 技术新闻

简要描述:EPI300 感受态 公司新闻

浏览量: 110

所属分类:感受态

更新日期:2021-03-24

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域生物产业

EPI300:                                                         100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl

保存条件(保质期):                         -80℃(6个月)

 

基因型

F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galgalK λ – rpsnupG trfdhfr.

 

 

 

 

产品说明

EPI300细胞含有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁,诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时,trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱导剂Ⅰ,ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳动物基因组DNA)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μg DNA。

 

 

 

 

操作方法

1. EPI300感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

    LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。

 


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