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Cell Counting Kit-8

Cell Counting Kit-8

简要描述:Cell Counting Kit-8,简称 CCK-8 试剂盒, 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。

浏览量: 189

所属分类:普通试剂

更新日期:2021-05-13

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域生物产业
  1. 产品包装

产品编号

名称

规格

L0001

Cell Counting Kit-8

1 mL

L0002

Cell Counting Kit-8

5 mL

L0003

Cell Counting Kit-8

100 mL

L0004

Cell Counting Kit-8

1 L

  1. 产品概述

Cell Counting Kit-8,简称 CCK-8 试剂盒, 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄 formazan (参考图 1) 。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成 formazan  )  和细胞数目呈线性关系( 2)

 

WST-8 MTT 的一种升级替代产品,和MTT 或其它MTT 类似产品,如 XTTMTS 等相比有明显的优点:MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的, 需要有特定的溶剂来溶解, WST-8 XTTMTS 产生的 formazan 是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤;WST-8 产生的 formazan XTT MTS 生的 formazan 更易溶解;WST-8 XTT MTS 更加稳定,使实验结果更可靠;WST-8 MTTXTT 等相比线性范围更宽, 灵敏度更高,并且更加稳定。 WST-8 对细

胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后, 可以在不同时间反复 用酶标仪读板,检测时间更加灵活,便于确定最佳测定时间。

  1. 操作说明

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

  1. 制作标准曲线
  1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;
  2. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 5-7 个细 胞浓度梯度,每组 4-6 个复孔;
  3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁,然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。
  1. 细胞活性检测
  1. 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ ) ,将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;
  2. 向每孔加入 10 μL  CCK-8  溶液 (意不要产生气泡)
  3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;
  4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
  1. 细胞增殖-毒性检测
  1. 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ ) ,将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;
  2. 向培养板加入不同浓度的待测药物;
  3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间;
  4. 向每孔加入 10 μL  CCK-8  溶液 (意不要产生气泡)
  5. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;
  6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
  1. 计算公式

细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,


 

不含药物)

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物)

 

 

 

Cell line : HEK293

Medium : DMEM, 10% FBS

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

 

 
 

 

 

Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS

Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

注:如果待测药物有氧化性或还原性,可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

  1. 保存条件

4°C 一年

-20°C 两年

长期保存,建议避光

  1. 注意事项
  1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时,但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,

CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

  1. 使用 96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面, 由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法, 改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
  2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 4加入药物中如含有金属,对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 15% 90% 显色反应,使灵敏度降 低。如果终浓度是10 mM 的话,将会 100% 抑制。
  1. 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
  2. 本产品可以检测,但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液,并培养 1-4 小时或过夜。
  3. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深,OD 值不断增加 (: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的)
  4. 要测定细胞的具体数量,建议同时做标准曲线。
  5. 建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异。
  6. 以下方法可以终止 CCK-8  反应 (96 孔板)

a.在显色反应后,将培养板放置 4°C 冰箱内。b.每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c).  每孔加 10 μL 1% (w/v)   SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。

注意:反应停止后,应在 24 小时内测定。11本产品仅限于专业人员的科学研究用, 不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

12)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



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